TLR4基因：揭示其与LPS直接关联并验证为Lps基因的产物

最近有两个功能实验进一步证实了Tlr4基因与Lps的直接关系。Hoshino等利用基因敲除技术制备出一种TLR4缺失（TLR4-/-）小鼠，发现这种小鼠的巨噬细胞，受LPS刺激时不能产生TNFα和NO，小鼠的脾脏B细胞对LPS也无增殖反应，实验结果与C3H/HeJ小鼠的细胞相同。作者进一步将C3H/HeJ和C3H/HeN小鼠的编码TLR4跨膜区和胞浆区的基因序列（氨基酸残基623~835）与编码小鼠CD14胞外区的基因序列（氨基酸残基1～384）融合，然后连接到哺乳动物的表达载体pEF-BOS，再与NF-kB报告质粒共转染到细胞内。结果显示，LPS刺激仅能使转染有来源于C3H/HeN的CD14-TLR4的细胞激活，表现为NF-kB活性增加，不能激活转染有C3H/HeJ小鼠CD14-TLR4的细胞。

Poltorak A研究小组最近也报道，野生型TLR4蛋白在RAW 264.7巨噬细胞内过度表达可显著增强细胞对LPS的敏感性，使EC50（effective concentration）减少30倍，但过度表达C3H/HeJ小鼠TLR4的同等型蛋白TLR4Pd则使细胞对LPS的敏感性显著降低，使EC50增加2600倍，即几乎完全抑制LPS的信号转导。上述结果进一步说明，TLR4是Lps基因的基因产物，或者说，以前提出的Lps基因与Tlr4为同一基因。因此，TLR4不仅特异性地识别LPS，而且能转导LPS的跨膜信号，在介导细胞LPS反应中发挥重要作用。